AFLP技術(shù)服務(wù)

AFLP標(biāo)記技術(shù)是1993年由荷蘭的Zabeau和Vos博士提出并完善的?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物多樣性，指紋圖譜的構(gòu)建，遺傳圖譜的構(gòu)建，基因克隆等諸多研究領(lǐng)域，顯示了廣闊的應(yīng)用前景。AFLP與其他分子標(biāo)記相比具有：1、DNA 用量少;2、可重復(fù)性好;3、多態(tài)性強(qiáng);4、分辨率高;5、樣品適用性廣，6、對(duì)基因組序列信息依賴性低等優(yōu)點(diǎn)。在物種的多態(tài)性分析中獲得廣泛的應(yīng)用。AFLP的選擇擴(kuò)增產(chǎn)物目前主要通過(guò)兩種方法進(jìn)行分離檢測(cè)，傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)的方法和自動(dòng)化程度較高的毛細(xì)管凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。

PAGE方法主要是AFLP的選擇擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳得到分離，然后通過(guò)銀染將條帶顯現(xiàn)出來(lái)，然后通過(guò)照相得到相應(yīng)的圖片，優(yōu)點(diǎn)是引物可以是普通引物，價(jià)格相對(duì)較低，做少量樣本或者大量樣本的引物篩選比較合適，另外還可以對(duì)差異條帶進(jìn)行克隆測(cè)序，獲得差異條帶的序列信息。

毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)是自動(dòng)化，可以對(duì)大量樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，速度快，后期的條帶讀取可以依靠軟件，降低了人為讀取的標(biāo)準(zhǔn)不一。

1)AFLP服務(wù)內(nèi)容

1 樣本基因組DNA的提取

2 篩選多態(tài)性較好的引物(酶切，預(yù)擴(kuò)，選擇性擴(kuò)增)

3-1 在ABI3730xl測(cè)序儀上完成數(shù)據(jù)采集

3-2 或是在JY-CX2B型 測(cè)序電泳槽上完成PAGE 檢測(cè)(可以回收差異帶)

4 數(shù)據(jù)分析：和客戶詳細(xì)溝通，確認(rèn)分析方案：讀取01矩陣(PAGE膠讀取另外收費(fèi));聚類分析;多樣性分析;多態(tài)位點(diǎn)數(shù)(AP) 、多態(tài)位點(diǎn)百分率( P) 、平均等位基因數(shù)(N a) 、有效等位基因數(shù)(N e) 、Nei′s基因多樣性指數(shù)(H) 、Shannon′s信息指數(shù)( I) 、遺傳分化度(Gst)等。利用NTSYS進(jìn)行聚類分析。

2)目前已經(jīng)進(jìn)行的樣本類型：樹(shù)木，草，花卉，昆蟲(chóng)，魚(yú)類，蝦類，真菌等;

3)客戶提供：

★ 基因組DNA：

●至少15μL樣品，濃度為50-100ng/μL;

●2%瓊脂糖電泳檢測(cè)有DNA主帶，沒(méi)有降解;

●DNA經(jīng)過(guò)DNA純化試劑盒或磁珠純化;

●DNA需溶解在TE或滅菌的去離子水里;

●DNA溶解后，肉眼看不到雜色;

★ 植物材料： 新鮮組織，葉片采用硅膠干燥后或干冰運(yùn)輸;

★ 動(dòng)物材料： 新鮮組織，無(wú)水乙醇封存低溫運(yùn)輸;

4)報(bào)價(jià)體系：